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【產品用途】本產品可應用于核酸DNA 的快速擴增。

【檢測原理】本產品是基于重組酶介導鏈置換核酸擴增（Recombinase-aid Amplification，RAA）技術開發(fā)的恒溫核酸擴增檢測試劑，在39℃恒溫條件下特異識別并擴增目標樣本的DNA片段，可用Genchek 熒光檢測儀實時監(jiān)控擴增過程，5-20 min 即可完成擴增檢測。

【技術原理】重組酶介導鏈置換核酸擴增（Recombinase-aid Amplification，RAA），是一種恒溫核酸快速擴增技術。從細菌或真菌中 獲得的重組酶在常溫下可與引物DNA緊密結合，形成重組酶/引物復合體，侵入DNA雙鏈核酸模板，在侵入位點重組酶將雙鏈打開，同時單鏈結合蛋白結合到被重組酶打開的單鏈上，維持雙鏈模板處于開鏈狀態(tài)。重組酶/引物復合體開始對雙鏈進行掃描，當引物在模板上搜索到與之完全匹配的互補序列時，重組酶/引物復合體解體，DNA聚合酶結合到引物的3’端，開始合成新鏈。合成的新鏈又可以作為模板，最終擴增產物以指數級增長，完成靶標基因的擴增。經過熒光標記的探針與擴增產物結合，當探針被核酸外切酶酶切后發(fā)出熒光信號，可對擴增過程進行實時監(jiān)控。本試劑盒具有快速、靈敏度高以及特異性強等優(yōu)點，反應組分已混合并冷凍干燥成反應干粉，操作簡便，易于保存。

【引物設計與探針設計】

引物設計建議方法：RAA核酸擴增技術對引物設計的要求與常規(guī)PCR引物設計有一定的區(qū)別。由兩條寡核苷酸組成一對引物，分 別特異性識別一個核酸目標物的上下游核苷酸序列；引物長度在30-35 nt之間，序列中無回文序列、連續(xù)單堿基重復序列和內部二級結 構區(qū)；引物Tm值不作為設計時主要考慮因素；最佳引物對需通過試驗優(yōu)化篩選得到，要求其擴增產物為單一條帶，無非特異性擴增和明顯的引物二聚體。

探針設計建議方法：探針序列不與引物識別位點重疊，長度在46-52nt之間，序列避免回文序列、內部二級結構和連續(xù)的重復堿基； 共有四個修飾位點，距離5’端的≥28nt的中部位置標記一個dSpacer（四氫呋喃，THF），作為核酸外切酶的識別位點；THF位點的上游標記一個熒光基團，下游標記一個淬滅基團，兩個基團的間距為2-4 nt，THF 距離3’末端≥15nt；3’末端標記一個修飾基團，例如胺基、磷酸基團、生物素、生物素-TEG 或C3-spacer。

建議：在開展RAA （熒光型）擴增反應之前，先進行引物的篩選試驗，以便得到較高的檢測靈敏度。

產品說明書：B8202C3 DNA恒溫快速擴增試劑盒（RAA熒光型）.pdf (251.76 K)

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